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染色质免疫沉淀技术的优缺点?
缺点是:需要一个特异性蛋白质抗体,有时难于获得;为了获得高丰度的结合片段,必须实验演示胞内条件下靶标蛋白质的表达情况;调控蛋白质的基因的获取可能需要限制在组织来源中。
染色质免疫共沉淀技术是在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来的技术。
染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定,染色质断裂,染色质免疫沉淀,交联反应的逆转,DNA的纯化及鉴定。
染色质免疫共沉淀 研究蛋白质与核酸相互结合的技术。甲醛固定时,相互靠近的蛋白与蛋白,蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。细胞内,能够相互结合的蛋白与基因靠的比较近,或者契合在一起。
因此,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP) 是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。
免疫共沉淀技术,将靶蛋白的抗体连接到固体基质上,再将可能与靶蛋白发生相互作用的待筛选蛋白加入反应体系中,用低离心力沉淀或微膜过滤法在固体基质和抗体的共同作用下将蛋白复合物沉淀到试管的底部或微膜上。
什么是染色质免疫共沉淀技术(ChIP)?
染色质免疫沉淀(ChIP)技术是一种在细胞或组织中检测特定染色质修饰和蛋白-DNA相互作用的方法。它具有以下优点和缺点:优点 高特异性:ChIP技术可以针对特定的染色质修饰或蛋白进行检测,具有很高的特异性。
ChIP-seq,指的是结合位点分析法,作为研究体内蛋白质与DNA相互作用。
染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP) 是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。
染色质免疫共沉淀技术是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法,是在表观遗传学研究和转录因子调控机制研究中发现的。
什么是染色质免疫共沉淀技术(ChIP)?染色质免疫共沉淀法是在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。
chip-chip是染色质免疫共沉淀技术(ChIP)及与芯片方法的结合。应用 ChIP-chip技术对于大规模挖掘顺式调控信息成绩卓著,同时它可以用于胚胎干细胞和一些疾病如癌症、心血管疾病和中央神经紊乱的发生的机制。
CHIP:染色质免疫沉淀原理与实验步骤
染色质免疫共沉淀技术是在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来的技术。
CHIP原理 利用抗体专一性特征,检测蛋白质-蛋白质相互作用。染色质免疫共沉淀 研究蛋白质与核酸相互结合的技术。甲醛固定时,相互靠近的蛋白与蛋白,蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。
ChIP-Seq的原理是:首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建;然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。
ChIP-seq需知问题及展望
1、最近,用于单细胞标记和ChIP-seq库制备的多种方法用于单细胞标记和ChIP-seq文库制备;这些方法使用微流体系统,Tn5转座酶标记,和ChIP-free的策略。
2、chipseq建库失败常见原因:样品不纯、样品质量下降、实验操作不当、仪器故障、质控失败等。
3、ChIP-Seq的原理是:首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建;然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。
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